PCR檢測試劑盒采用一步法實時熒光反轉錄聚合酶鏈式反應(One-StepRealTimeRT-PCR),結合Taqman技術,對特異核酸進行定性或定量檢測。用于對AIV進行檢測,有助于對AIV的實驗室診斷、監(jiān)測和流行病調(diào)查。
結果成立原則
陽性對照:CT值<30并有明顯的擴增曲線。
陰性對照:無CT值或者CT值>37,線性為直線或者輕微斜線,無明顯擴增曲線。
以上要求需同時滿足,否則本次實驗無效,需要重新進行。
PCR檢測試劑盒在整個檢測過程中的注意事項:
1.整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在使用前應全部轉移至標本準備區(qū),并單獨存放。
6.為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7.儀器擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。