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    費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌轉(zhuǎn)化的操作步驟

    點(diǎn)擊次數(shù):802次  更新時間:2017-09-27

    費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌轉(zhuǎn)化操作步驟
    (1)事先將恒溫水浴的溫度調(diào)到42℃。
    (2)從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管(100μl)感受態(tài)菌,立即用手指加溫融化后插入冰上,冰浴5~10min。
    (3) 加入5μl連接好的質(zhì)?;旌弦海―NA含量不超過100ng),輕輕震蕩后放置冰上20min。
    (4) 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進(jìn)行熱休克,然后迅速放回冰中,靜置3~5min。
    (5) 在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500μl LB培養(yǎng)基(不含抗菌素)輕輕混勻,然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h.
    (6) 在超凈工作臺中取上述轉(zhuǎn)化混合液100~300μl,分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養(yǎng)皿中,用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻(注意:玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻,待其冷卻后再涂)。
    (7) 如果載體和宿主菌適合藍(lán)白斑篩選的話,滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal,8μl 20% IPTG,用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
    (8) 在涂好的培養(yǎng)皿上做上標(biāo)記,先放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養(yǎng)基里后,再倒置過來放入37℃恒溫培養(yǎng)箱過夜。
    (9) 在被費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌污染的桌面上噴灑70%乙醇,擦干桌面,寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
    (10)觀察平板上長出的菌落克隆,以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。
        含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    去甲氧基姜黃素    20mg/支    英文名稱    Demethoxycurcumin    規(guī)格:
    雙去甲氧基姜黃素    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    雙去氧基姜黃素    20mg/支    英文名稱    Bisdemethoxycurcumin    規(guī)格:
    姜黃醇    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    莪術(shù)醇    20mg/支    英文名稱    Curcumol    規(guī)格:
    槲皮素-3-半乳糖苷    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    金絲桃苷    20mg/支    英文名稱    Hyperoside    規(guī)格:
        含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    金絲桃素    20mg/支    英文名稱    Hypericin    規(guī)格:
        含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    絞股藍(lán)皂苷    20mg/支    英文名稱    Stevenleaf    規(guī)格:
    扁桃苷    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    苦杏仁苷    20mg/支    英文名稱    Amygdalin    規(guī)格:
        含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    苦參堿    20mg/支    英文名稱    Matrine    規(guī)格:
    費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌

     

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